被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光，经过单色器变成单色荧光后照射于光电倍增管上，由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪。一个激发，一个发射，采用双单色器系统，可分别测量激发光谱和荧光光谱。
荧光光谱仪特点
（1）荧光分析的主要特点是灵敏度高、选择性好，荧光分析的灵敏度要比吸收光谱测量高2-3个数量级。分光光度法通常在 10-7 级，而荧光的灵敏度达10-9。
（2）强选择性强，荧光物质具有两种特征光谱：激发光谱和吸收光谱，相对于分光光度法单一的吸收光谱来说，荧光光谱可根据激发光谱和发射光谱来鉴定物质。
（3）信息量丰富，能提供荧光物质的多种参数。
（4）但是荧光分析方法也有其不足之处：①很多物质本身不发荧光；②荧光的产生与化合物结构的关系不明确；③干扰因素多，光分解、氧淬灭、易污染。
荧光光谱仪主要用途
（1）荧光激发光谱和荧光发射光谱
（2）同步荧光（波长和能量）扫描光谱
（3）3D（Ex Em Intensity)
（4）Time Base和CWA(固定波长单点测量）
（5）荧光寿命测量，包括寿命分辨及时间分辨
（6）计算机采集光谱数据和处理数据（Datamax和Gram32)
