高效液相色谱仪(HPLC)是应用高效液相色谱原理,主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。它由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。广泛应用于生命科学、食品科学、药物研究以及环境研究中。
工作时储液器中的流动相被高压泵压入检测系统,样品溶液经进样器进入色谱系统,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,在其通过检测器时,被转换成信号传送到记录仪,数据以图谱形式输出。
高效液相色谱仪的柱压是否稳定与色谱图峰形好坏、分离效果、保留时间等有着密切关联。以下是常见的几种柱压问题及解决方法:
(1)柱压升高
①色谱柱被堵塞,解决方法更换新的色谱柱;
②系统压力零点飘移,解决方法:调节压力传感器的零点;
③阻尼器堵塞,解决方法:拆下后进行超声波清洗或更换新的阻尼器;
④进样器、管路或连接口堵塞,解决方法:参见说明书进行清洗。
(2)柱压降低:
①无流动相流出,解决方法:检查贮液瓶中有无流动相、沉子是否浸没在流动相中、泵是否运行;
②系统存在漏液,解决方法:检查各部件的连接点,进行再次固定;
③参比阀未关闭,解决方法将流速降低后关闭参比阀。
(3)柱压不稳
①系统管路中存在气泡,解决方法重新进行排气操作;
②沉子表面的小孔被堵,解决方法:将沉子取下后进行超声波清洗。