液相色谱仪(HPLC)是分析实验室常用的测试仪器之一,其应用越来越广泛。此种仪器在使用过程中,难免会出现各种各样的问题,并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因,即可清楚预防和排除这些故障的方法,就可正确地使用仪器并zui大限度地发挥仪器的性能。今天我们要从以下几个方面和您分享下在使用液相色谱仪中需注意的几个问题。
液相色谱仪使用注意事项
流动相必须用HPLC级的试剂,使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
流动相过滤后要用超声波脱气,脱气后应该恢复到室温后使用。
不能用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时,然 后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,以充分洗去离子。对于柱塞杆外部,做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水保存柱子,而应该用有机相(如甲醇等),因为纯水易长霉。
每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
C18柱不能进蛋白样品,血样、生物样品。
堵塞导致压力太大,按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。清洗方法;①以异丙醇作溶剂冲洗:②放在异丙醇中间用超声波清洗;⑧用10%稀硝酸清洗。
气泡会致使压力不稳,重现性差,所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
如果进液管内不进液体时,要使用注射器吸液:通常在输液前要进行流动相的清洗。
要注意柱子的pH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。
更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗,然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。